چکیده:
زمینه مطالعه: ویروس‌های آنفلوانزای پرندگان شامل تحت تیپ H9N2سبب ضررهای اقتصادی قابل ملاحظه‌ای به صنعت طیور می شوند. تشخیص سریع و دقیق عفونت آنفلوانزای پرندگان در برنامه‌های ریشه کنی و کنترل این بیماری بسیار مهم می‌باشد. هدف: هدف ازاین مطالعه تواید آنتی بادی‌های منوکلونال اختصاصی نوکلئوﭘروتئین ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ H9N2 برای بهبود و بیشرفت روش‌های تشخیصی بود. روش کار: ﭘروتئین نوترکیب NP در باکتری E.coli بیان گردید و با استفاده از ستون کروماتوگرافی رزین آمیلوز خالص سازی و به عنوان یک آنتی ژن برای ایمن سازی به موش تزریق شد. فیوژن سلول‌های طحال با سلول‌های میلوما انجام شد. در مرحله بعد مایع رویی کشت سلولی کلون‌های هیبریدوما اولیه به وسیله الایزای غیر مستقیم غربالگری شدند. بعد از سه بار کلونینگ واکنش آنتی بادی‌های منوکلونال با آنتی ژن‌های طبیعی و نوترکیب به وسیله وسترن بلات تأیید شد. نتایج: شش آنتی بادی منوکلونال اتصال اختصاصی به نوکلئوﭘروتئین نوترکیب و طبیعی در ویروس آنفلوانزای برندگان تحت تیپ H9N2 در وسترن بلات٬ الیزا و ایمونوفلورسانس را نشان دادند. واکنش متقاطع با ویروس‌های غیر مرتبط از لحاظ ژنتیکی از جمله ویروس نیوکاسل (خانواده ﭘارامیکسوویریده) تشخیص داده نشد. نتیجه گیری نهایی: بر‌اساس نتایج آنتی بادی‌های منوکلونال تولید شده در این مطالعه می‌توانند برای طراحی آزمایشات تشخیصی سریع برای شناسایی ویروس آنفلوانزای ﭘرندگان استفاده شوند
چکیده انگلیسی:
Background: Avian influenza viruses (AIVs) including the subtype H9N2 cause considerable financial losses to poultry industries. Rapid and accurate diagnosis of avian influenza (AI) infection is important in control and eradication programs. OBJECTIVES: The aim of this study was to produce monoclonal antibodies (MAbs) specific for the nucleocapsid protein )NP (of AIV H9N2 subtype to improve diagnostic assays. METHODS: Recombinant NP protein was expressed in Escherichia coli and purified using amylose resin chromatography column and used as an antigen for mice immunization. Spleen cells of the immunized mice were fused with SP2/0 myeloma cells. Next, culture supernatants of primary hybridoma clones were screened by indirect ELISA. After three rounds of sub cloning, the reactivity of the MAbs with recombinant and natural antigens was assessed by Western blotting. RESULTS: Six MAbs showed specific binding to recombinant and natural NP from AIV H9N2 in Western blot analysis, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunofluorescence assay. Cross-reactivity with genetically non-related including Newcastle viruse (Paramyxoviridae family) was not detected. CONCLUSIONS: Based on the results, the MAbs generated in this study could be used for the development of rapid diagnostic assays for recognition of AIV.
خبرنامه
برای ثبت نام در خبرنامه و دریافت خبرنامه ایمیل خود را وارد نمایید.
