چکیده:
زمینه مطالعه: یکی از جنبه های اصلی ردیابی مواد غذایی در جهت آزمایشات اعتبار سنجی آنها شناسایی و تعریف روش های عملی جهت شناسایی منشا ماده غذای می باشد. هدف: هدف از مطالعه حاضر، پیدا کردن یک روش مبتنی بر DNA برای احراز هویت و قابلیت ردیابی از مواد غذایی است که از اهمیت زیادی در مدیریت بهداشت و درمان برخوردار می باشند. روش کار: در این مطالعه 4 روش مختلف جهت استخراج DNA خالص از تعدادی روغن خوراکی شامل روغن زیتون ،آفتابگردان، کانولا، و سویا برای بهبود ردیابی این روغن ها بررسی گردید. DNA استخراج شده به روش PCR با استفاده از پرایمر عمومی واقع شده در ناحیه ژن 18S rRNA/5.8S rRNA انجام شد. روش استخراج بر اساس اتصال DNA به لایه ی سیلیکایی موجود در ستون ها و یا اتصال به رزین بنا شده بود. نتایج: نتایج به دست آمده از روش اول نشان داد فقظ DNA استخراج شده از روغن زیتون توانایی تکثیر را داشت. در روش دوم با استفاده از محلول PBS و بدنبال آن ایجاد رسوب با ایزو پروپانول تکثیر DNA از روغن های آفتابگردان، کانولا خام و روغن زیتون با موفقیت انجام شد. برای حذف موثر تر ناخالصی ها روش دو با کلروفرم و رزین و رسوب دهی با ایزوپروپانول بعنوان روش سوم مورد استفاده قرار گرفت. خوشبختانه با این روش DNA های استخراج شده ازتمامی نمونه های روغن با موفقیت تکثیر شدند. برای حذف اثرات سوء کلرفرم روش چهارم با استفاده ی مستقیم از بافر لیز کننده و بافر اتصال طراحی شد. با این روش DNA های استخراج شده ازتمامی نمونه های روغن با موفقیت تکثیر شدند. نتیجه گیری نهایی: بر اساس یافته های ما، مشکل عمده DNA استخراج شده از روغن ها، باقی ماندن مهار کننده های آنزیم های مختلف از قبیل DNA پلیمراز می باشدکه این مشکل با استفاده از روش های ارائه شده 3 و 4 قابل حل می باشد. است.
چکیده انگلیسی:
Background: One of the major aspects of traceability in food authenticity assessment is to explore practical methods to find the origin of food. Objective: The aim of the present study was to find a DNA based method for authentication and traceability of food, which are of great importance in health management. Methods: Four different DNA extraction methods were applied to obtain high pure DNA in some oil samples including olive oil, sunflower, canola and soybean oil to improve the traceability. The isolated DNA was analyzed by PCR using common primer pair, derived from the region harboring 18S rRNA/5.8S rRNA genes. Extraction methods were developed based on specific binding of DNA molecules to the silica membrane (column) or resin. Results: Our results showed that amplifiable DNA could only be extracted from olive oil in method 1, whereas the isolated DNA from other samples needed to be purified. In method 2, by pre-treating of oil with PBS and subsequent precipitation with Isopropanol, the amplification of isolated DNA was observed in sunflower, crude canola and olive oil. To remove more effectively the contaminants, method 2 was combined with chloroform and resin/Isoporopanol precipitation as method 3. Interestingly, the extracted DNA from all examined oil samples could be amplified with mentioned primers. For elimination the disadvantages of chloroform, method 4 was set up by direct usage of lysis and binding buffer. The extracted DNA from all refined oil samples could be amplified successfully. Conclusion: Based on our findings, the major problem in DNA extraction from oils is the PCR inhibitors in extracted DNA, which can be resolved by the presented methods 3 and 4.
خبرنامه
برای ثبت نام در خبرنامه و دریافت خبرنامه ایمیل خود را وارد نمایید.
