چکیده:
زمینه مطالعه: آیمریا نکاتریکس عامل کوکسیدیوز حداکثر تأثیر اقتصادی را بر روی تولید پرندگان دارد. به نظر میرسد پروتئینهای میکرونم نقش مهمی در حرکت انگل و تهاجم به سلولهای میزبان دارد. هدف: جداسازی و خالصسازی اووسیست آیمریا نکاتریکس از استان خوزستان-ایران بود. یک cDNA کد کننده پروتئین میکرونم 5 (EnMIC5) کلون و پس از بیان کردن این پروتئین نوترکیب، خاصیت ایمنیزایی آن توسط وسترن بلوتینگ مورد آزمایش قرار گرفت. روش کار: یک جفت پرایمر بر اساس توالی نوکلئوتیدی موجود برای ژن میکرونم 5 آیمریا نکاتریکس سویه LZ طراحی و به وسیله آن توالی بخشی از cDNA کد کننده این پروتئین به میزان bp 758 با استفاده از روش Semi- Nested RT-PCR تکثیر گردید سپس قطعه بدست آمده به درون وکتور pMAL-c2x حاوی پروتئین باند شونده به مالتوز کلون و در باکتری E . coli سویه TG1 بیان گردید. قطعه تکثیر شده، یک open reading frame 252 اسیدآمینه ای داشت که به میزان قابل توجهی حاوی مناطق حفاظت شده شامل پری کالکرئین پلاسمایی چسبنده و هفت جزء آبدوست بود. نتایج: در SDS-PAGE پروتئین الحاقی با وزن مولکولی در حدود 70 کیلو دالتون پس از القاء توسط IPTG بیان شد. آزمایش وسترن بلات نشان داد که پروتئین نوترکیب با سرم بدست آمده از جوجههای آلوده به آیمریا نکاتریکس واکنش میدهد. نتیجه گیری نهایی: یافتهها نشان داد پروتئین بدست آمده قدرت ایمنیزایی نسبتاً خوبی داشته و میتواند در آینده مورد مطالعه بیشتری قرار گیرد.
چکیده انگلیسی:
Background: Coccidiosis caused by Eimeria necatrix has the most economic impact on poultry production. Micronemal proteins in Eimeria necatrix are thought to be critical ligands determining host cell specificity at the time of invasion. OBJECTIVES: Isolation and purification of Eimeria necatrix oocysts from Khuzestan province of Iran was performed. A cDNA encoding microneme 5 (EnMIC5) protein was cloned and expressed as recombinant protein before the evaluation of its immunogenicity by Western blotting. METHODS: A primer pair was designed based on the published nucleotide sequence of Eimeria necatrix LZ strain micronem5 gene. A Partial cDNA sequence fragment of 758 bp coding for microneme 5 protein (EnMIC5) was amplified by semi- Nested RT-PCR. PCR products were cloned and expressed in a Maltose Binding protein (MBP) containing expression vector (pMAL-c2x) in Escherichia coli. The cDNA which is encoded for 252 amino acids shows high degree of conservation. It contains the adhesive plasma pre-kallikrein and seven hydrophilic motifs. RESULTS: The results of SDS-PAGE revealed that the recombinant protein with a molecular weight of 70 kDa was over-expressed after induction with IPTG. Western blotting results revealed that the expressed recombinant protein was reacted with sera of the chicks infected with Eimeria necatrix. It was suggested that this protein should have a good immunogenicity and can be used for further studies. CONCLUSIONS: In conclusion, the high degree of sequence homology indicates that this protein is immunogenic and might be an interesting vaccine target, and deserves further investigation
خبرنامه
برای ثبت نام در خبرنامه و دریافت خبرنامه ایمیل خود را وارد نمایید.