چکیده:
دربین همه تکنیک های رایج برای جهش زایی هدفمند سیستم λ Red recombinase به طور گسترده ای برای غیرفعال کردن ژن های کروموزومی در باکتری ها استفاده شده است. در این روش همیشه خطر تجزیهDNA خطی وارد شده توسط آنزیم های محدود الاثر وجود دارد که سبب کاهش فرکانس نوترکیبی می شود. برای رفع این مشکل ما یک وکتور نوترکیب برای غیرفعال کردن ژن phoP در سالمونلا تیفی موریوم ساختیم. به منظور ساخت این وکتور از SOEing PCR و آنزیم های محدودالاثر استفاده شد. پلاسمید حاصل،pTAAZ92، حاوی یک کاست کانامایسین با دو بازوی طویل هومولوگ مجاور ژنphoP می باشد. با الکتروپوریشن pTAAZ92 به سالمونلا تیفی موریوم کاست کانامایسین از طریق نوترکیبی همولوگ جایگزین ژن phoP می شود. با توجه به هومولوژی زیاد ژن phoP در بسیاری از گونه های سالمونلا می توان از این پلاسمید برای حذف ژن phoP در اکثر این گونه ها استفاده نمود.
چکیده انگلیسی:
BACKGROUND: Among all common techniques in sitedirected mutagenesis, λ Red recombinase system has been widely used to knock out chromosomal genes in bacteria. In this method, there is always the risk of DNA Linear digestion by host's restriction enzymes that leads to the low frequency of recombination. OBJECTIVES:To overcome this, we constructed a recombinant vector to disrupt phoP gene in Salmonella typhimurium. METHODS: The SOEing PCR method and restriction enzymes were used to construct the vector. RESULTS: The resulting plasmid, pTAAZ92, contains a Kanamycin cassette with two long homologous arms flanking of the phoP gene. CONCLUSIONS: After electrotransformation of the pTAAZ92 into the Salmonella typhimurium , the phoP gene is replaced by the Kanamycin cassette through homologous recombination. According to the high homology of the phoP gene in many of Salmonella species the pTAAZ92 can be used to disrupt the phoP gene in most of these species.
خبرنامه
برای ثبت نام در خبرنامه و دریافت خبرنامه ایمیل خود را وارد نمایید.
