شناسایی رئوویروس‌های ایجادگر تنوسینوویت در پرندگان از گله‌های مرغ مادر ایران به روش RT-PCR و RFLP
شناسایی رئوویروس‌های ایجادگر تنوسینوویت در پرندگان از گله‌های مرغ مادر ایران به روش RT-PCR و RFLP
عنوان فارسی :
شناسایی رئوویروس‌های ایجادگر تنوسینوویت در پرندگان از گله‌های مرغ مادر ایران به روش RT-PCR و RFLP
عنوان انگلیسی :
Detection of avian reoviruses causing tenosynovitis in breeder flocks in Iran by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and restriction enzyme fragment length polymorphism (RFLP)
چکیده:
زمینـه مـطالعه: رئوویروس پرندگان از مهمترین عوامل بیماری‌های پرندگان به‌ویژه آرتریت رئوویروسی، تنوسینوویت، بیماری مزمن تنفسی، و سندرم سوء جذب می‌باشند. رخداد تنوسینوویت در مرغان مادر از سایر رده های طیور پرورشی بیشتر می‌باشد. هدف: هدف از این بررسی شناسایی رئوویروس های ایجادگر تنوسینوویت در پرندگان از گله های مرغ مادر ایران به روش RT-PCR و RFLP بود. روش کار: در این مطالعه از گله های مرغ مادر با سن بالای 45 هفته، 800 نمونه مدفوعی با سواپ اخذ گردید و در محیط PBS به آزمایشگاه منتقل گردید و در نهایت بعد از مخلوط کردن نمونه ها از یک مزرعه، 120 نمونه جهت بررسی حضور رئوویروس ها مورد استفاده قرار گرفت. در این مطالعه برای تشخیص رئوویروس های ایجادگر تنوسینوویت از پرایمرهایی اختصاصی برای نواحی ژنومی 1Sبا باند هدف pb 1023 و 4S با باند هدف bp437 استفاده شد. نتایج: بعد از انجام آزمایش PCR، 5 نمونه با استفاده از پرایمرهای ناحیه ژنومی 1S و 6 نمونه با استفاده از پرایمرهای نـاحیـه ژنومی 4S مثبت شدند که موارد مثبت با 5 آنزیم هضم کننده مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. آنالیز قطعات حاصله از هضم آنزیمی محصـولات PCR در تمـامی نمونه های مثبت دلالت بر همسان بودن الگوی هضم آنزیمی نمونه‌ها با الگوی هضم هر دو سویه واکسن و استاندارد 1133S داشت. نتیجه گیری نهایی: در این بررسی مشخص شد که بکارگیری روش مولکولی RT-PCR/RFLP روش مناسبی جهـت شنـاسـایـی رئـوویـروس‌هـا مـوجـود در مـزرعـه و متمـایـز کردن آنها از همدیگر می‌باشد. این مطالعه اولین مطالعه مولکولی بر روی رئوویروس‌های ایجادگر تنوسینوویت در ایران می باشد که بر مبنای شناسایی 2 ناحیه ژنومی 1S و 4S و نیز بکار گیری 5 آنزیم هضم کننده در گله های مرغ مادر در ایران صورت گرفت.
چکیده انگلیسی:
BACKGROUND:Avian reoviruses (ARVs) are members of the Orthoreovirus genus; one of the 12 genera of the Reoviridae family. The ARVs are the cause of some important diseases in poultry such as reovirus-induced arthritis, tenosynovitis, chronic respiratory disease, and mal-absorption syndrome. OBJECTIVES: In this study, the presence of ARVs in the Iranian breeder flocks was investigated through reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) and restriction enzyme fragment length polymorphism (RFLP). METHODS: A total of 800 fecal swab samples were initially collected from breeder flocks (older than 45 weeks of age). They were then sent to the laboratory in containers with PBS, and after that they were pooled and finally to 120 samples were obtained. The total RNA extracted from the pooled fecal samples were used to amplify the selected parts of the S1 (1023 bp) and S4 (437 bp) genes from the ARV field isolates using RT-PCR. The positive RT-PCR amplified products were further analyzed by RFLP using five restriction enzymes. RESULTS: Based on the findings, 5 samples were positive with the S1 primer and 6 samples were with the S4 one. The patterns observed after the digestion of PCR products revealed that the isolates of this study were identical to both the S1133 vaccine and standard strains. CONCLUSIONS: The findings suggested that the RT-PCR/RFLP analysis might be considered as a simple and rapid approach for the differentiation of ARVisolates. This study was the first molecular detection of the ARVs presence in the Iranian breeder flocks using the RTPCR amplification of the S1 and S4 genes and RFLP analysis.
خبرنامه
برای ثبت نام در خبرنامه و دریافت خبرنامه ایمیل خود را وارد نمایید.
